什么是银染：
银染是一种特殊而强大的染色技术，可用于检测和鉴定凝胶中的蛋白质。这是因为银结合在氨基的化学末端或侧链上，即羧基和巯基。它已经被用于从聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离蛋白质。银染是一种高度灵敏的方法，对蛋白质具有特异性和选择性。它产生的图像背景更少，质谱干扰更少。银染的一般程序包括银的固定、致敏作用、银的浸渍和图像的形成。一些被改良的银染方法能在一小时内完成，另一些需要24小时才能完成。末端染色可以稳定保持几周。
图1：银染结果（图片来源于Polysciences/ Inc/）
银染的原理：
银染有两种主要方法，差异主要在银浸渗阶段。
碱法：
该方法主要是利用铵和***组成的碱性空间中的硝酸银的二胺络合物。
蛋白质模式是在稀释的酸性的甲醛溶液中形成的。
酸法：
该方法采用水中的硝酸银溶液进行凝胶浸渍，并在氨和***的碱性环境下的甲醛溶液中建立蛋白质模式。银染是一种简单的方法，将靠近蛋白质分子的起始位点的银选择性还原为不溶的金属银。
银染色的各个阶段是：
蛋白质的固定和干扰成分的去除。
用加速蛋白质对银和/或银还原（敏感和洗涤）的元素进行凝胶处理。
用纯硝酸银或氨化银浸渍银
凝胶冲洗和获得银金属图像。
所产生的图像***影取决于附着在银质上的蛋白质的数量。
银染的蛋白显示深棕色或黑色，这取决于染色银的颜色强度。
颜色的变化是由于不同大小的银颗粒的散射和衍射。
银染所需的试剂：
1/ 3%丙烯酰胺溶液：将2/0 ml 0/8 M Tris-HCl（pH 8/6）、0/75 ml 38/9%（w/v）丙烯酰胺和1/1%（w/v）双丙烯酰胺加入7/25 ml水中和8 mg过硫酸铵混合制备。
2/20%丙烯酰胺溶液：将2/0 ml 0/8 M Tris-HCl（pH 8/6）、5/0 ml 38/9%丙烯酰胺和1/1%双丙烯酰胺以及8 mg过硫酸铵加入3 ml水中。
3/用40%乙醇、10%醋酸、50%水混合配制固定液。
4/由20%乙醇、5%乙酸、75%水、4 mg二硫苏糖醇混合配制蛋白质处理溶液。
5/0/5%重铬酸盐
6/0/1%硝酸银
7/用0/02%多聚甲醛、3%碳酸钠制备络合物形成溶液
8/1%乙酸
银染步骤：
银染的步骤比较多，但这里只讨论两个最主要的步骤。通常需要先跑聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）后，再进行银染。
步骤A：SDS-PAGE。这里不再赘述。
步骤1B：银染。
1/ 加入固定液30分钟，固定凝胶。
2/ 用蛋白质处理液处理凝胶30分钟。
3/ 用0/5%的重铬酸盐冲洗凝胶5分钟。
4/ 用水清洗凝胶5分钟。
5/ 用0/1%的硝酸银平衡凝胶30分钟。
6/ 用水清洗凝胶1分钟。
7/ 用络合物形成溶液液，在pH值12下孵育凝胶。
8/ 加入1%的乙酸终止络合物的形成。
9/ 将凝胶固定在玻璃或聚酯板上进行观察和/或储存。
步骤2B：硝酸银长染色
1/SDS-PAGE处理后，将凝胶固定在30%乙醇和10%乙酸中60分钟。
2/更换固定液，放置过夜。
3/使用四硫代酸盐增敏溶液使凝胶增敏45分钟。
4/用20%的乙醇冲洗凝胶，分两部分（两次），每次洗涤至少10分钟。
5/用水冲洗凝胶四次，每次冲洗10分钟。
6/用12 mM的硝酸银浸渍凝胶。
7/将凝胶浸泡在硝酸银中，放在一个半装满水、碱性显影剂和一个装有终止液的盒子（每升40克Tris和20毫升醋酸）中。
8/用去离子水冲洗，并将凝胶从银溶液中取出。
9/在水浴中浸泡10秒钟，然后转移到基本的显影剂溶液中。
10/通过剥离含显影剂凝胶盒来重新溶解沉淀。
11/达到染色程度后，将凝胶转移到三停止溶液中30分钟。
12/用水清洗凝胶，观察或储存。
银染的应用：
1/一般来说，银染可以作为细菌和真菌感染的诊断工具，如假单胞菌、钯密螺旋体、幽门螺杆菌、军团菌、钩端螺旋体、巴尔通体、肺孢子虫、念珠菌、***原体、隐球菌、隐球菌引起的感染。所有这些生物都能被银染色上。
2/ 银染可用于检测和可视化蛋白质。
3/ 银染可以用来识别蛋白质的结构差异。
4/ 银染可以定量样品中的蛋白质的数量。
5/银染也可以用于检测DNA和RNA分子的样本来对基因组进行分析。
6/银染也用于SDS-PAGE检测细菌脂多糖。
7/银染也可用于检测***活检中的真菌脂多糖。
银染的优势和不足：
优势：操作简单、成本低、结果可靠、敏感度高、更持久并且也能用于DNA和RNA的染色
不足：背景高且不稳定
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