友情提示：自从小编有些粉丝和流量之后，得到了很多家人们的认可和赞扬，在此表示感谢。但是收到私信问问题的也越来越多，几乎每天都变成了义务辅导，非常耽误时间，而且很多人提问不用“请问”，小编耐心回答完，他也不说“谢谢”。
为了避免效率低下，以后想问问题的，先打赏再提问。如果你连打赏都不舍得，我为什么要浪费时间义务帮你呢？
想要质粒的可以直接说，但别抱幻想我一套十几个质粒免费馈赠你，还得帮你出邮费。让你导师去问朋友要，人家都不一定愿意给。家人们咱们得懂点***规矩，不能只谈感情不谈钱。
说正事：
最近家人们在空斑试验（plaque assay）上遇到的问题挺多的，也有可能是大家一直有问题，只是小编不知道大家有问题。问题主要分为2大类：（1）没有空斑；（2）细胞脱落。现就这两大问题说说可能的原因，大家对号入座去解决就行了。
问题（1）没有空斑。这个问题的前提是基于你的***没有问题，感染操作也没有问题。比如你不知道流感的感染要加tpck胰酶导致不出空斑的，建议先去其他低级公众号上先学学再来学咱们这个进阶版。
像下图这样的，确认***和感染操作都没问题，但是就是没有空斑的，非常大的概率是因为你加的覆盖物（overlay）用的是琼脂糖。因为大家习惯性一次配很多，反复加热反复用，这样会导致琼脂糖浓度越来越高。你以为还是相同的比例和培养基混合的，其实浓度可能翻了好几倍了。这个overlay的浓度越高，空斑越小，浓度高到一定程度可能就没有空斑了。这就是为什么很多人问同一瓶琼脂糖，同样的比例，同样的操作，以前能做出来空斑，现在越做越小或者做不出来了。
图1：空斑问题1
小编本人做plaque assay用的是下图的右边的avicel，从来不用琼脂糖。很多plaque的问题都来自于琼脂糖。
1是浓度越用越高，慢慢的就不出斑了。
2是每次用都要加热，操作上浪费时间，对懒人不友好。
3是热的琼脂糖可能损伤细胞。
4是收plaque，倒或者刮琼脂糖的时候容易把细胞扯下来。
想要右边avicel（粉末，可配任意浓度，一次用一年）的联系小编。用过都说好，空斑无烦恼。
图2：三种overlay（左：琼脂糖；中：CMC；右：avicel）
问题（2）细胞脱落。细胞脱落又主要分为两种情况，1是像下图这种非常典型的案例，以中间为主的细胞脱落，这种极大概率是你弃掉培养基，感染前或者感染完弃掉上清准备加overlay的时候，板子太干导致的细胞死亡脱落。这种情况和季节还有天气有一些关系，细胞房里空气干燥就容易发生。2是不规则不定点的细胞脱落，主要是倒琼脂糖或者刮琼脂糖导致的。
图3：空斑问题2
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